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Post by jone447 on Aug 1, 2023 22:02:55 GMT -8
(图 4g),以避免由于 Tial1 KD 在肝细胞中的蛋白质半衰期长达 50 小时而重复进行 siRNA 转染46。虽然我们没有观察到Tial1 KO 和亲本细胞之间增殖或形态的差异,但我们在所有独立 KO 克隆中测量到 INSIG2 增加了约 6 倍,从而证实了我们在 Tial1 LKO 动物中的体内发现(图 4g )。为了测试 TIAL1 与 Insig2 的结合是否有效,我们将小鼠 Insig2 的 3'UTR 克隆到 psiCHECK2 载体中,紧邻报告者海肾荧光素 酶的开放阅读框下游。然后将该构建体转染到 Hepa 1–6 Tial1 KO 细 亚洲手机号码列表胞中,然后进行荧光素酶活性测量作为 Insig2 3'UTR 调节的代理。与WT细胞和空对照构建体中的活性相比, Tial1 KO细胞中Insig2 3'UTR构建体的荧光素酶活性显着更高(图4h)。当我们使用重组 Ad-Tial1 在 WT 细胞中过表达 Tial1 时,我们测量到与 Ad-Ctrl 感 染细胞相比荧光素酶活性降低(图 4i)。当用染 Tial1耗尽的 Hepa1-6 细胞时,这种效应被放大,并且用 Ad-Tial1 挽救 Tial1 表达,并与 Ad-Ctrl 感染的细胞进行比较(图4i ))。最后,在野生型和 Tial1 LKO 小鼠的原代肝细胞中进行的代谢标记实验显示,Tial1 缺陷细胞中新生 INSIG2 蛋白的合成增加,而 HuR(一种 Tial1 不靶向的转录物)没有测量到对
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